چكيده1

مقدمه3

1-1 - تالاسمي8

1-2-اتيولوژي و سبب شناسي تالاسمي8

1-2-1 - خون شناسي9

1-2-2- خون سازي و گلبولهاي قرمز10

1-3- تالاسمي و انواع آن10

1-3-1 آلفا تالاسمي10

1-3-2- بتا تالاسمي11

1-3-2-1 بتا تالاسمي مينور(سالم ناقل)11

1-3-2-2 – بتا تالاسمي ماژور( بيماري تالاسمي)12

1-3-2-3-بتا تالاسمي بينابيني13

1-4- تشخيص تالاسمي13

1-5- درمان تالاسمي13

1-6- فيزيولوژي عنصر آهن و اهميت آن در بدن انسان14

1-6-1- مسموميت حاد آهني15

1-7- دسفرال16

1-7-1- نحوه استفاده از داروي دسفرال17

1-7-2-كاربردهاي داروي دسفرال در پزشكي18

1-7-3- عوارض ناشي از داروي دسفرال19

1-7-4- اقدامات احتياطي در مورد داروي دسفرال19

1-7-5- ملاك توقف درمان بوسيله دسفرال20

2-1- سيدرو فورها22

2-1-1- هيدروكسامات ها24

2-1-2-فنولات ها يا كاتكولات ها25

2-2- دسفري اكسامين ها26

2- 2-1 – ساختمان دسفري اكسامين28

2-2-2- دسفراكسامين بصورت آنتي اكسيدان28

2-2-3 – خصوصيات فيزيكو و شيميايي دسفراكسامين29

2-2-4- مكانيسم دسفراكسامين در جلوگيري از بيماريهاي با بار اضافي آهن29

2-2-5- تشكيل راديكال  DFO nitroxide30

2-3- دسفري اكسامين B31

2-3-1- بيوسنتر دسفري اكسامين B33

2-3-2- ژنهاي كد كننده دسفري اكسامين B33

2-4- توليد كننده­هاي دسفري اكسامين34

2-5- اهميت آهن بر روي ميكروارگانيسمها35

2-6- مكانيسم عمل سيدروفورها در ارتباط با انتقال آهن به درون سلول ميكروارگانيسمها36

2-7- توليد، استخراج و تخليص دسفري اكسامين B37

3-1- اكتينوميست ها40

3-2- استرپتومايسس ها43

3-2-1- پاتولوژي43

3-2-2 – مرفولوژي و ساختمان43

3-2-3- مشخصات كلني454

3-2-4- اسپورزايي47

3-2-5- تركيبات پوشش سلولي49

3-2-6- تغذيه و فاكتورهاي موثر بر رشد و خصوصيات فيزيكوشيميايي49

3-2-6-1- تغذيه49

3-2-6-2- اكسيژن50

3-2-6-3 - رطوبت50

3-2-6-4- دما51

3-2-6-5- pH51

3-2-6-6- اكولوژي52

3-2-6-7- بيولوژي توسعه يافته استرپتومايسس53

3-2-7- انواع فرآورده هاي ميكروبي56

3-2-7-1- متابوليت هاي اوليه56

3-2-7-2- متابوليت هاي ثانويه56

3-2-7-2-1- آنتي بيوتيك ها58

3-2-7-2-1-1- فيزيولوژي و تنظيم توليد آنتي بيوتيك58

3-2-7-3- آنزيمها63

3-2-7-3-1- پروتئازها63

3-2-7-3-1-1- پروتئازهاي اسيدي67

3-2-7-3-1-1-1- رنين67

3-2-7-3-1-2- پروتئازهاي خنثي67

3-2-7-3-1-3- پروتئاز های قلیایی67

3-2-7-3-1-3-1- فرآیند تخمیر پروتئازهای قلیایی68

3-2-7-3-1-3-2- تعیین فعالیت پروتئاز قليايي69

3-2-7-3-1-4- بازدارنده های فعالیت آنزیم پروتئاز وشلاته کننده ها69

3-2-7-3-1-5- تجزیه71

3-2-7-3-1-6- پروتئاز ها و استرپتومایسسها71

3-2-8- محيط كشت تخمیر صنعتی71

3-2-8-1- نيازهاي غذايي ميكروارگانيسم‌ها71

3-2-8-1-1- كربن74

3-2-8-1-1-1- منابع کربن و استرپتومایسس ها77

3-2-8-1-2-نيتروژن78

3-2-8-1-2-1- منابع نيتروژن و استرپتومايسس ها80

3-2-8-1-3- هيدروژن و اكسيژن80

3-2-8-1-4- مواد معدني80

3-2-8-2-تنظيم كننده هاي متابوليكي81

3-2-8-3- ضد كف ها82

3-2-9- بیوسنتز در استرپتومايسس ها83

4-1- دستگاه هاي مورد استفاده86

4-2- وسايل مورد استفاده86

4-3 - محيط هاي كشت مايع براي رشد باكتري88

4-4- محيط هاي كشت جامد براي رشد باكتري89

4-5- محيط هاي جامد براي توليد اسپور89

4-6- مواد لازم جهت رنگ آميزي گرم90

4-7- مواد لازم جهت استفاده از ميكروسكوپ نوري91

4-8- محيط مورد استفاده جهت شناسايي كيفي دسفري اكسامين: محيط Des₄91

4-9- محيط مورد استفاده جهت اندازه گيري توليد دسفري اكسامين محيط Soy bean 91

4-10- مواد لازم جهت نگهداري و ذخيره باكتري ها92

4-11- معرف هاي دسفري اكسامين92

4-12- مواد لازم جهت رسم منحني استاندارد دسفري اكسامين B92

4-13- مواد لازم جهت استخراج دسفري اكسامين92

4-14- مواد لازم جهت تهيه محلول Lysing Buffer93

4-14-1 – مواد لازم جهت تهيه محلول Tris Hcl93

4-15- محلول كازئين %5/0 دربافر فسفات93

4-15-1- بافر فسفات (PBS)93

4-16- محلول لوري (Lowry)93

5 – ١- تهيه و آماده سازي سويه استرپتومايسس پيلوسوس98

5 ـ ٢ ـ بررسي خصوصيات مرفولوژيكي سويه استرپتومايسس پيلوسوس98

5-٢-١- خصوصيات ماكروسكوپي99

5- ٢-١-١- كشت استرپتومايسس پيلوسوس بر روي محيط جامد99

5-٢-١-٢- كشت استرپتومايسس پيلوسوس در محيط مايع99

5-٢-٢ خصوصيات ميكروسكوپي99

5-٢-٢-١- تهيه لام از محيط كشت جامد99

5-٢-٢-٢- تهيه لام از محيط كشت مايع100

5ـ ٢ـ٢ـ ٣ـ رنگ آميزي گرم100

5 ـ ٣ـ تهيه مايع تلقيح100

5 ـ ٣ـ ١ـ تهيه محيط ذخيره101

5 ـ ٣ـ ٢ـ تهيه سوسپانسيون اسپور101

5ـ ٤ـ رسم منحني رشد استرپتومايسس پيلوسوس101

5ـ ٥ـ بررسي تغييرات pH در محيط كشت Soybean102

5ـ ٦ـ توليد دسفري اكسامين توسط استرپتومایسس پيلوسوس102

5ـ ٦ـ ١ـ تشخيص كيفي دسفري اكسامين102

5ـ ٦ـ ٢ـ سنجش ميزان توليد دسفري اكسامين در هر روز103

5-6-3- رسم منحني استاندارد دسفرال103

5-٧ـ استخراج دسفري اكسامين بوسيله فنل-كلروفرم104

 5 ـ ٧ـ ١ـ مزتیله كردن دسفري اكسامين105

5-8- تعيين وجود دسفري اكسامين B در ماده استخراج شده105

5ـ ٩ـ بهينه سازي محيط كشت توليد دسفري اكسامين107

5ـ ٩ـ ١ـ بررسي اثر اسيد آمينه ترئونين بر توليد دسفري اكسامين107

5 ـ ٩ـ ١ـ ١ـ بررسي اثر اسيد آمينه ترئونين بر توليد دسفري اكسامين در يك محدوده غلظت107

5ـ ٩ـ ٢ـ بررسي اثر اسيدآمينه ترئونين و اسيد آمينه لوسين و ويتامين تیامینB₁)  ( برتوليد دسفري اكسامين 108

5 ـ ٩ـ ٣ـ بررسي گلوكز و ملاس و سوكروز بر توليد دسفري اكسامين108

5ـ ٩ـ ٤ـ بررسي اثر شلاته كننده هاي كاتيون بر تولید دسفری اکسامین108

5 ـ ٩ـ ٥ـ استفاده از محيط كشت عصاره مخمر به جاي استفاده از محيط كشت Soybean109

5 ـ ٩ـ ٦ـ بررسي اثر مواد معدني مختلف بر ميزان توليد دسفري اكسامين109

5 ـ٩ـ٦ـ١ـ بررسي تاثير مواد معدني در غلظت هاي مختلف بر ميزان توليد دسفري اكسامين111

5 ـ ١٠ - بررسي پروتئاز توليدي از استرپتومايسس پيلوسوس در حضور شلاته كننده ها و مواد معدني مختلف112

5 ـ ١٠ـ ١ـ كشت باكتري و سنجش پروتئاز112

5 ـ ١٠ـ 2ـ تخليص كازئين113

6ـ ١ـ بررسي خصوصيات مرفولوژيكي ماكروسكوپي استرپتومایسس پيلوسوس115

6ـ ١ـ ١­ـ خصوصيات ماكروسكوپي سويه استاندارد بر روي محيط كشت جامد115

6 ـ ١ـ٢ـ خصوصيات ماكروسكوپي سويه استاندارد در محيط كشت مايع115

6 ـ ٢ـ بررسي خصوصيات مرفولوژيكي ميكروسكوپي استرپتومایسس پيلوسوس116

6 ـ٣ـ رسم منحني رشد استرپتوماسيس پيلوسوس در محيط كشت MYB116

6-4- رسم منحني pH بر حسب زمان در محيط كشت Soybean حاوي سويه استرپتومايسس پيلوسس118

6 ـ ٥ـ تشخيص كيفي و كمي دسفري اكسامين توليدي120

6-5-1- تشخيص كيفي و توليد و يا عدم توليد دسفري اكسامين120

6ـ٥ـ2ـ رسم نمودار استاندارد دسفرال120

6ـ٥ـ3ـ میزان دسفري اكسامين توليدي در هر روز توسط سویه استرپتومایسس پیلوسوس در محيط Soy bean121

6-6- نتايج مربوط به استخراج دسفري اكسامين توليد شده توسط سويه استرپتومايسس پيلوسوس122

6-6-1- نتايج مربوط به تأييد وجود دسفري اكسامين B در ماده استخراج شده122

6-7- بهينه سازي محيط كشت توليد دسفري اكسامين124

6-7-1 بررسي اثر اسيد آمينه ترئونين بر توليد دسفري اكسامين124

6-7-1-1- بررسي اثر اسيد آمينه ترئونين بر توليد دسفري اكسامين در يك محدوده غلظت124

6ـ7ـ ٢ـ بررسي اثر اسيد آمينه هاي ترئونين و لوسين و ويتامين تيامين (B₁ )126

6 ـ 7ـ٣ـ بررسي گلوكز ، ملاس، سوكروز بر توليد دسفري اكسامين126

6ـ 7ـ ٤ـ بررسي اثر شلاته كننده هاي كاتيون بر ميزان توليد دسفري اكسامين127

6ـ 7ـ ٥ـ استفاده از محيط كشت عصاره مخمر به جاي استفاده از محيط كشتSoybean128

6 ـ 7ـ ٦ـ بررسي اثر مواد معدني مختلف بر ميزان توليد دسفري اكسامين128

6 – 7 – 6 – 1 – بررسي اثر مواد مختلف با غلظت متفاوت بر ميزان توليد دسفري اكسامين 130